O documento descreve a técnica de imunoquimioluminescência, que quantifica antígenos ou anticorpos em fluidos corporais através da emissão de luz resultante de uma reação química. A técnica envolve a ligação do antígeno/anticorpo a uma substância quimioluminescente, de modo que a luz emitida é proporcional à quantidade do analito. A imunoquimioluminescência oferece vantagens em relação ao radioimunoensaio, como ausência de materiais radioativos e maior
1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 IMUNOQUIMIOLUMINESCÊNCIA Trabalho realizado pela Doutoranda de Imunologia da UFBA Mírian Flores Rebouças sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
5. Muito usado para dosagens de hormônios, marcadores tumorais e outras proteínas séricas.
6.
7. Radioimunoensaio: Primeira técnica a ser desenvolvida para dosagem hormonal e de outras substâncias presentes em pequenas concentrações em fluídos biológicos, sendo um método muito sensível para análise quantitativa antígeno-anticorpo.
29. PASSOS DA TÉCNICA Uma microesfera de poliestireno é revestida com anticorpo monoclonal contra antígeno analisado Adição do soro do paciente, que é incubado com agitação intermitente. Lavagem para retirada do antígeno não fixado Y Adição de anticorpo monoclonal específico para o antígeno pesquisado conjugado a enzima. Y Y Y Incubação do conjugado e mais uma lavagem para tirar o anticorpo não fixado Y Y Adição do substrato da enzima, em seguida, incubação. A adição de substrato quimioluminescente sofre hidrólise na presença da enzima, produzindo substâncias instáveis que geram emissão de fótons (luz). Y Conjugado Anticorpo monoclonal Antígeno do soro do paciente Substrato Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y
30. PASSOS DA TÉCNICA Estes fótons são medidos través de um fotomultiplicador (PMT) que tem a função de transformar a luz emitida pelos fótons em impulsos elétricos. Estes impulsos são lidos em “contagens” de luz por segundo (cps). Essa unidade é proporcional a quantidade de antígenos presentes na amostra.
31. REFERÊNCIAS Edwards, R. Imunnodiagnostics, a pratical approach. Oxford University Press. 281 pg, 1999. Howard, G.C.; Kaser, M.R. Making and using antibodies, a pratical handbook.CRC Press. 396 pg, 2006. http://alvaro.com.br/home/palestras/8 http://quimicanova.sbq.org.br/qn/qnol/1993/vol16n3/v16_n3_%20(6).pdf http://www2.ucg.br/cbb/professores/49/Biomedicina/6_periodo/Quimioluminescencia.pdf Zhao, L.; Sun, L.; Xiaogang Chu. Chemiluminescence immunoassay. Trends in Analytical Chemistry, Vol. 28, No. 4, 2009.