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BALANCE DE MATERIA
 EN BIOPROCESOS


adapatricia33@yahoo.es
ALREDEDORES



                                       ALREDEDORES
                                         SISTEMA




Sistema cerrado                             Sistema abierto
proceso discontinuo                                  proceso continuo
•   Sistema se encuentra separado de los alrededores, los cuales son el resto del
    universo.
•   El limite del sistema puede ser real como las paredes de un fermentador o
    imaginario.
SISTEMA ESTACIONARIO
• Cuando todas las propieades del sistema como son
  temperatura, presion, concentracion, volumen, masa, etc no
  varian con el tiempo.

ECUACION GENERAL DE BALANCE DE MATERIA

Entrada - salida + generación – consumo = acumulación




Sistema continuo en estado estacionario

Cuando Acumulación = 0
Entrada + generación = Salida + consumo
CUANTIFICACION DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO
Estudio cuantitativo de la cinética de
fermentaciones.
Métodos experimentales sencillos para
determinar el crecimiento de poblaciones
microbianas
Considerar el modo de reproducción de
las células
Las células procarióticas bacterianas se
reproducen por fisión binaria sin que sea
posible diferenciar una célula madre de una
célula hija.

Edad máxima     c/célula es el lapso
comprendido entre dos replicaciones
sucesivas


Edad de cultivo es el tiempo transcurrido
desde la inoculación.
Las bacterianas se presentan en forma
individual o en asociaciones débiles de
pocos individuos,pudiendo ser
dispersadas homogéneamente en el
medio de cultivo
Las eucarióticas como levaduras se
desarrollan en células individuales
fácilmente dispersables que se
reproducen por gemación produciendo
una célula hija y una célula madre.
Cultivo de levaduras es heterogéneo en
cuanto a la edad y por lo tanto el
estado fisiológico de las células que lo
componen.
 Los hongos por crecimiento apical
formando hifas
Características reológicas no-
newtonianas.
Métodos de cuantificación
del crecimiento microbiano
Método             Fundamento                  Observaciones
                  Conteo directo No
Recuento en celda de células        Requiere células individuales

 Nefelometría      Conteo directo No RCI Influencias de las
                   de células        condiciones de incubación
 N.M.P.            Dispersión de luz Requiere cultivo
                                      homog. y traslúcido

 Peso Seco          Estadístico          RCI y medio limpio

 Turbimetría       Transmisión de luz    RCI y medio limpio

 Vol. empacado     Centrifugación        Poco preciso

 Físico Químicos   Variados indirectos   ∆η, pH, análisis de
                                         Comp. celulares, etc
 Balance de masa Conservación de         Gran cantidad de datos
                 masa                    analíticos
dX
   = µ.X
dt

 X                   t
∫X                ∫
         dX
              = µ . dt
     0
          X         0



X = Xo. e.t



       1 dX d(lnX) Δ(lnX)
     μ= .   =     =
       X dt   dt     Δt
1 dX   d(lnX)       Δ(lnX)
                       μ =     .  =          =
                             X dt      dt           Δt
    X = Xo. eµ.t
X                      Ln X




                             µ


                   t                                  t
Se estudia el crecimiento celular de un microorganismo
 obteniendo los siguientes datos


      t             X

     dias       celulas/ml

      0         4.50E+05            2           1.77E+06
                                   2.5          2.13E+06
     0.2        5.20E+05
                                    3           3.55E+06
     0.5        6.50E+05           3.5          4.02E+06
      1         8.10E+05            4           3.77E+06
                                   4.5          2.20E+06
     1.5        1.22E+06

a) Calcular la velocidad específica del crecimiento celular
durante la fase de crecimiento
b) El tiempo de duplicación del cultivo
4.5E+06                                   16
    4.0E+06                                   15.5
    3.5E+06
                                              15
    3.0E+06
                                              14.5
    2.5E+06




                                                     Ln X
                                              14
X




    2.0E+06
                                              13.5
    1.5E+06

    1.0E+06
                                              13

    5.0E+05                                   12.5
    0.0E+00                                   12
              0   1    2       3      4   5
                      Tiempo (dias)
15.5

          15

         14.5
Ln (X)



          14

         13.5
                                    ln X = 13.01+0.67 t
          13                             R2 = 0.99
         12.5
                0   0.5   1      1.5  2   2.5    3    3.5
                              Tiempo (dias)
Estequiometría del crecimiento



    El crecimiento de las células obedece la ley de
         Conservación de Energía y Materia
   Los átomos de (C), (O), (N) y otros elementos
consumidos durante el crecimiento se incorporan a las
    nuevas células o se expulsan como productos
SUSTRATO               Fuente de N           Biomasa o células

CwHxOyNz + aO2 + b HgOhNi  c CHON +dCO2 + eH2O                     (I)

          W=6, X=12, Y=6 y Z=0a, b, c, d y e              Coef. Estequiom.
        Aprox. macroscópica C,H,O y N                    95%
        C          50           Na                         1
        N                 20                 Ca           0.5

        O                 14                 Mg           0.5
        H                  8                 Cl           0.5
        P                  3                  Fe           0.2
         S
                           1              Otros            0.3
        K                  1
    Composición de la bacteria Escherichia coli
Calculo de Coeficientes
CwHxOyNz + aO2 + b HgOhNi  c CHON +dCO2 + eH2O                       (I)

 Balance de C                :   w = c + d                   :    (i)    a
 Balance de H          :   x + b g = cα + 2e                     : ii)
                                                                         b
                                                                         c
 Balance de O         y + 2a + bh = cβ + 2d + e                  (iii)
                                                                         d
 Balance de N                z + bi = δc                         (iv)    e
  COEFICIENTE                        Moles CO producidos
                                         de 2           d
                                 RQ=                  =
  RESPIRACION                        Moles O consumidos
                                         de 2           a

  Debemos estar seguros que el sustrato no se utiliza para sintetizar
  otros productos extracelulares que no sean CO2 y H2O

  Resolviendo el sistema de ecuaciones Lineales
• Las bacterias tienden a tener contenidos de nitrogeno
  ligeramente mayores (11-14%).

• Los hongos tiene (6.3 – 9%)

• Cuando no se dispone de la composición puede utilizarse como
  formula general : CH1.8O0. 5N1.2
  este es el peso molecular medio de la biomasa basado en los contenidos
  C,H,O,N es por lo tanto 24.6, aunque existe normalmente un 5 - 10%
  de ceniza residual que no se incluye en la formula.
14
                            y = -0.461x + 11.675
                   12
                                 R 2 = 0.9999
C{e lula s [g/l]


                   10
                    8
                    6
                    4
                    2
                    0
                        0   10            20       30
                             Sustra to [g/l]
Rendimiento de biomasa                   ( Yx/s)

  DURANTE el CRECIMIENTO existe una relación lineal
   entre [Biomasa] producida y el [Sustrato] consumido


          g células producidas                MWCélulas
   Yx/s =                            Yx/s = c
          g sustratoconsumido                 MWSustrato



Yx/s = k durante el crecimiento, su valor deter. experim.
puede utilizarse para calcular el coef. estequiom. C
Mw = peso molecular.
Para utilizar esta ecuación el sustrato no se debe utilizar
para sintetizar otros productos que no sean CO2 y H2O.
Estequiometría del producto                          (II)



CwHxOyNz + aO2+ b HgOhNi  cCHαOβNδ +dCO2+eH2O + fCjHkOlNm

SUSTRATO      Fuente de N    Biomasa               Producto

    Rendimiento de producto a partir del sustrato: Yp/s

                     g producto formado
           Yp/s    =
                     g sustrato consumido

                        MW
           Y p/s    = f       P   roducto
                        MW     Sustrato
Se debe asegurare de que el sistema
experimental utilizado para medir Yp/s
corresponde a la ecuación (II)
No puede aplicarse a la producción
metabólica secundaria como la fermentación
de la penicilina
Formación de producto debe estar asociado
directamente con el crecimiento celular
Balance de electrones
y grado de reducción                        [H2O]= k

Balances de H y O pueden presentar dificultades
Conservación de potencia reductora o electrones
disponibles
Si no se conoce la composición de las celulas el B puede
tomarse como 4.2
           Electrones disponibles
 Al número de electrones disponibles
 para transferir al O2 en la combustión
 del sustrato a CO2, H2O y compuestos
 que contengan nitrógeno
Se calcula a partir de la valencia de su elementos



  C         4              S          6
  H         1                        -3   NH3

  O        -2             N           0    N2

  P         5                         5   NO3
CwHxOyNz + aO2+ b HgOhNi  cCHON +dCO2+eH2O + fCjHkOlNm

Se define como el número de equivalentes de electrones disponibles
en aquella cantidad de materia que contenga 1 g átomo de carbono



 Origen     Fórmula # de electrones              Grado de
                    disponibles                  reducción 
Biomasa     CHαOβNδ        4 + α - 2β - 3δ    4+α -2β-3δ
Sustrato    Cw Hx O y Nz   4w + x - 2y - 3z   (4w + x – 2y-3z)/w

Producto    CjHkOlNm                          (4j + k - 2l - 3m)/j
                           4j + k - 2l – 3m
Composición elemental y grado de
reducción para algunos microorganismos
(en relación al NH3)
BALANCE DE MASA Y ENERGIA

      Demanda teórica de oxigeno

 La demanda de oxígeno (a) está directamente
 relacionado con los electrones disponibles
 O2 es el sustrato limitante en las fermentaciones
 aeróbicas




 Cuando existe síntesis de producto, como
 el representado por la ecuación (II) el
 balance de electrones es:
Demanda teórica de oxigeno

 w γs – 4 a = c γB +f j γp                              (1)
  a = ¼( w γs - c γB - f j γp)                         (2)
La Ec.(2) es muy útil porque si se conoce el microorganismo (γB),
el sustrato (w y γs) y el producto (j y γp) involucrados en el
cultivo celular, y el rendimiento de biomasa (c ) y de producto (f),
la demanda de oxígeno (a) puede calcularse rápidamente.
a puede determ. resolviendo los coef. Esteq.de la ecuación (II).

La ec. (2) permite una evaluación más rápida y no es necesario
conocer las cantidades de NH3, CO2 y H2O involucrados.
Reparto de electrones disponibles en el sustrato
             Rendimiento máximo posible.


     4a                 cγ                f.j. γ p
                +           B        +             = 1
   w. γ s               w. γ s             w. γ s
     (s)                 (B)                (P)
 fracción de e       fracción de e        Fraccion de e
 disponibles transf  disponibles transf   transferidos al
 desde el Sust al O2 a la Biomasa         Producto
                                                    w γs
            w γs                            f max =
    c max =                                         j γp
             γB
                                   el rendimiento máximo
si todos los e disponibles         de producto en
se utilizaran para la síntesis     ausencia de síntesis de
de biomasa ηB = 1                  biomasa
Rendimientos termodinámicos máximos de biomasa
Requerimientos nutricionales
               del Medio de Cultivo
   para la construcción de una nueva célula esta contenida en los
    cromosomas.
   La materia debe ser suministrada a través de los componentes del
    medio de cultivo.
   La E se obtiene del catabolismo de la fuente de C de cultivo.
   Crecimiento microbiano  una ecuación química.
   C, H, O y N y Mg, S, P,Ca, Na y K
   Otros compuestos a niveles muy bajos y deben ser suministrados
    como compuestos aptos para ser metabolizados.
    La fuente de C: Carbohidrato-orgánico, CO2, CO3-2 HCO3-1 (caso
    de células quimioautotróficas o fotosintéticas).
   La fuente de N : Amonio, nitrógeno amino de aminoácidos y
    proteínas, úrea, nitrato o nitrógeno elemental
Medios complejos

   Son formulados en base a desechos, subproductos y
    extractos naturales.
   la melaza, licor de maceración de maíz, extracto de
    levadura y otros
   Su composición química es compleja y variable.
   Contiene varias fuentes de cada elemento.
   Pueden requerir ser suplementados con compuestos que
    proporcionen cantidades adicionales de algunos
    elementos, tales como, N, Mg y P
   Muy utilizados en microbiología básica (taxonomía,
    fisiología y genética), microb. analítica, producción de
    algas, alimentos, suelos y en fermentaciones
    industriales
Componentes de medios complejos industriales




a nivel industrial Baratos   Mejores rendimientos
Medios definidos

   Se formulan en base a compuestos puros, tales
    como la glucosa, sulfato de amonio, metionina,
    fosfatos, etc
   composición química es conocida y reproducible.
   fuentes de cada elemento y los nutriente
    esenciales que pueden ser requeridos.
   investigación y desarrollo de Proceso de
    fermentación.
   permiten un mejor control de las condiciones
    ambientales de crecimiento y producción.
   resultan más productivas cuando se utilizan
    medios definidos.
Ejemplo de medios definidos
Ejercicios resueltos de Balance de Materia
               Problema 1




                                        Continua…….
Ejercicios resueltos de Balance de Materia
               Problema 1
Ejercicios resueltos de Balance de Materia
               Problema 1
          Corrida del Programa
Ejercicios resueltos de Balance de Materia
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  • 1. BALANCE DE MATERIA EN BIOPROCESOS adapatricia33@yahoo.es
  • 2. ALREDEDORES ALREDEDORES SISTEMA Sistema cerrado Sistema abierto proceso discontinuo proceso continuo • Sistema se encuentra separado de los alrededores, los cuales son el resto del universo. • El limite del sistema puede ser real como las paredes de un fermentador o imaginario.
  • 3. SISTEMA ESTACIONARIO • Cuando todas las propieades del sistema como son temperatura, presion, concentracion, volumen, masa, etc no varian con el tiempo. ECUACION GENERAL DE BALANCE DE MATERIA Entrada - salida + generación – consumo = acumulación Sistema continuo en estado estacionario Cuando Acumulación = 0 Entrada + generación = Salida + consumo
  • 4. CUANTIFICACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Estudio cuantitativo de la cinética de fermentaciones. Métodos experimentales sencillos para determinar el crecimiento de poblaciones microbianas Considerar el modo de reproducción de las células
  • 5. Las células procarióticas bacterianas se reproducen por fisión binaria sin que sea posible diferenciar una célula madre de una célula hija. Edad máxima c/célula es el lapso comprendido entre dos replicaciones sucesivas Edad de cultivo es el tiempo transcurrido desde la inoculación.
  • 6. Las bacterianas se presentan en forma individual o en asociaciones débiles de pocos individuos,pudiendo ser dispersadas homogéneamente en el medio de cultivo Las eucarióticas como levaduras se desarrollan en células individuales fácilmente dispersables que se reproducen por gemación produciendo una célula hija y una célula madre.
  • 7. Cultivo de levaduras es heterogéneo en cuanto a la edad y por lo tanto el estado fisiológico de las células que lo componen. Los hongos por crecimiento apical formando hifas Características reológicas no- newtonianas.
  • 8. Métodos de cuantificación del crecimiento microbiano
  • 9. Método Fundamento Observaciones Conteo directo No Recuento en celda de células Requiere células individuales Nefelometría Conteo directo No RCI Influencias de las de células condiciones de incubación N.M.P. Dispersión de luz Requiere cultivo homog. y traslúcido Peso Seco Estadístico RCI y medio limpio Turbimetría Transmisión de luz RCI y medio limpio Vol. empacado Centrifugación Poco preciso Físico Químicos Variados indirectos ∆η, pH, análisis de Comp. celulares, etc Balance de masa Conservación de Gran cantidad de datos masa analíticos
  • 10. dX = µ.X dt X t ∫X ∫ dX = µ . dt 0 X 0 X = Xo. e.t 1 dX d(lnX) Δ(lnX) μ= . = = X dt dt Δt
  • 11. 1 dX d(lnX) Δ(lnX) μ = . = = X dt dt Δt X = Xo. eµ.t X Ln X µ t t
  • 12. Se estudia el crecimiento celular de un microorganismo obteniendo los siguientes datos t X dias celulas/ml 0 4.50E+05 2 1.77E+06 2.5 2.13E+06 0.2 5.20E+05 3 3.55E+06 0.5 6.50E+05 3.5 4.02E+06 1 8.10E+05 4 3.77E+06 4.5 2.20E+06 1.5 1.22E+06 a) Calcular la velocidad específica del crecimiento celular durante la fase de crecimiento b) El tiempo de duplicación del cultivo
  • 13. 4.5E+06 16 4.0E+06 15.5 3.5E+06 15 3.0E+06 14.5 2.5E+06 Ln X 14 X 2.0E+06 13.5 1.5E+06 1.0E+06 13 5.0E+05 12.5 0.0E+00 12 0 1 2 3 4 5 Tiempo (dias)
  • 14. 15.5 15 14.5 Ln (X) 14 13.5 ln X = 13.01+0.67 t 13 R2 = 0.99 12.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Tiempo (dias)
  • 15. Estequiometría del crecimiento El crecimiento de las células obedece la ley de Conservación de Energía y Materia Los átomos de (C), (O), (N) y otros elementos consumidos durante el crecimiento se incorporan a las nuevas células o se expulsan como productos
  • 16. SUSTRATO Fuente de N Biomasa o células CwHxOyNz + aO2 + b HgOhNi  c CHON +dCO2 + eH2O (I) W=6, X=12, Y=6 y Z=0a, b, c, d y e Coef. Estequiom. Aprox. macroscópica C,H,O y N 95% C 50 Na 1 N 20 Ca 0.5 O 14 Mg 0.5 H 8 Cl 0.5 P 3 Fe 0.2 S 1 Otros 0.3 K 1 Composición de la bacteria Escherichia coli
  • 17. Calculo de Coeficientes CwHxOyNz + aO2 + b HgOhNi  c CHON +dCO2 + eH2O (I) Balance de C : w = c + d : (i) a Balance de H : x + b g = cα + 2e : ii) b c Balance de O y + 2a + bh = cβ + 2d + e (iii) d Balance de N z + bi = δc (iv) e COEFICIENTE Moles CO producidos de 2 d RQ= = RESPIRACION Moles O consumidos de 2 a Debemos estar seguros que el sustrato no se utiliza para sintetizar otros productos extracelulares que no sean CO2 y H2O Resolviendo el sistema de ecuaciones Lineales
  • 18. • Las bacterias tienden a tener contenidos de nitrogeno ligeramente mayores (11-14%). • Los hongos tiene (6.3 – 9%) • Cuando no se dispone de la composición puede utilizarse como formula general : CH1.8O0. 5N1.2 este es el peso molecular medio de la biomasa basado en los contenidos C,H,O,N es por lo tanto 24.6, aunque existe normalmente un 5 - 10% de ceniza residual que no se incluye en la formula.
  • 19. 14 y = -0.461x + 11.675 12 R 2 = 0.9999 C{e lula s [g/l] 10 8 6 4 2 0 0 10 20 30 Sustra to [g/l]
  • 20. Rendimiento de biomasa ( Yx/s) DURANTE el CRECIMIENTO existe una relación lineal entre [Biomasa] producida y el [Sustrato] consumido g células producidas MWCélulas Yx/s = Yx/s = c g sustratoconsumido MWSustrato Yx/s = k durante el crecimiento, su valor deter. experim. puede utilizarse para calcular el coef. estequiom. C Mw = peso molecular. Para utilizar esta ecuación el sustrato no se debe utilizar para sintetizar otros productos que no sean CO2 y H2O.
  • 21. Estequiometría del producto (II) CwHxOyNz + aO2+ b HgOhNi  cCHαOβNδ +dCO2+eH2O + fCjHkOlNm SUSTRATO Fuente de N Biomasa Producto Rendimiento de producto a partir del sustrato: Yp/s g producto formado Yp/s = g sustrato consumido MW Y p/s = f P roducto MW Sustrato
  • 22. Se debe asegurare de que el sistema experimental utilizado para medir Yp/s corresponde a la ecuación (II) No puede aplicarse a la producción metabólica secundaria como la fermentación de la penicilina Formación de producto debe estar asociado directamente con el crecimiento celular
  • 23. Balance de electrones y grado de reducción  [H2O]= k Balances de H y O pueden presentar dificultades Conservación de potencia reductora o electrones disponibles Si no se conoce la composición de las celulas el B puede tomarse como 4.2 Electrones disponibles Al número de electrones disponibles para transferir al O2 en la combustión del sustrato a CO2, H2O y compuestos que contengan nitrógeno
  • 24. Se calcula a partir de la valencia de su elementos C 4 S 6 H 1 -3 NH3 O -2 N 0 N2 P 5 5 NO3
  • 25. CwHxOyNz + aO2+ b HgOhNi  cCHON +dCO2+eH2O + fCjHkOlNm Se define como el número de equivalentes de electrones disponibles en aquella cantidad de materia que contenga 1 g átomo de carbono Origen Fórmula # de electrones Grado de disponibles reducción  Biomasa CHαOβNδ 4 + α - 2β - 3δ 4+α -2β-3δ Sustrato Cw Hx O y Nz 4w + x - 2y - 3z (4w + x – 2y-3z)/w Producto CjHkOlNm (4j + k - 2l - 3m)/j 4j + k - 2l – 3m
  • 26. Composición elemental y grado de reducción para algunos microorganismos (en relación al NH3)
  • 27.
  • 28. BALANCE DE MASA Y ENERGIA Demanda teórica de oxigeno La demanda de oxígeno (a) está directamente relacionado con los electrones disponibles O2 es el sustrato limitante en las fermentaciones aeróbicas Cuando existe síntesis de producto, como el representado por la ecuación (II) el balance de electrones es:
  • 29. Demanda teórica de oxigeno w γs – 4 a = c γB +f j γp (1) a = ¼( w γs - c γB - f j γp) (2) La Ec.(2) es muy útil porque si se conoce el microorganismo (γB), el sustrato (w y γs) y el producto (j y γp) involucrados en el cultivo celular, y el rendimiento de biomasa (c ) y de producto (f), la demanda de oxígeno (a) puede calcularse rápidamente. a puede determ. resolviendo los coef. Esteq.de la ecuación (II). La ec. (2) permite una evaluación más rápida y no es necesario conocer las cantidades de NH3, CO2 y H2O involucrados.
  • 30. Reparto de electrones disponibles en el sustrato Rendimiento máximo posible. 4a cγ f.j. γ p + B + = 1 w. γ s w. γ s w. γ s (s) (B) (P) fracción de e fracción de e Fraccion de e disponibles transf disponibles transf transferidos al desde el Sust al O2 a la Biomasa Producto w γs w γs f max = c max = j γp γB el rendimiento máximo si todos los e disponibles de producto en se utilizaran para la síntesis ausencia de síntesis de de biomasa ηB = 1 biomasa
  • 32. Requerimientos nutricionales del Medio de Cultivo  para la construcción de una nueva célula esta contenida en los cromosomas.  La materia debe ser suministrada a través de los componentes del medio de cultivo.  La E se obtiene del catabolismo de la fuente de C de cultivo.  Crecimiento microbiano  una ecuación química.  C, H, O y N y Mg, S, P,Ca, Na y K  Otros compuestos a niveles muy bajos y deben ser suministrados como compuestos aptos para ser metabolizados.  La fuente de C: Carbohidrato-orgánico, CO2, CO3-2 HCO3-1 (caso de células quimioautotróficas o fotosintéticas).  La fuente de N : Amonio, nitrógeno amino de aminoácidos y proteínas, úrea, nitrato o nitrógeno elemental
  • 33. Medios complejos  Son formulados en base a desechos, subproductos y extractos naturales.  la melaza, licor de maceración de maíz, extracto de levadura y otros  Su composición química es compleja y variable.  Contiene varias fuentes de cada elemento.  Pueden requerir ser suplementados con compuestos que proporcionen cantidades adicionales de algunos elementos, tales como, N, Mg y P  Muy utilizados en microbiología básica (taxonomía, fisiología y genética), microb. analítica, producción de algas, alimentos, suelos y en fermentaciones industriales
  • 34. Componentes de medios complejos industriales a nivel industrial Baratos Mejores rendimientos
  • 35. Medios definidos  Se formulan en base a compuestos puros, tales como la glucosa, sulfato de amonio, metionina, fosfatos, etc  composición química es conocida y reproducible.  fuentes de cada elemento y los nutriente esenciales que pueden ser requeridos.  investigación y desarrollo de Proceso de fermentación.  permiten un mejor control de las condiciones ambientales de crecimiento y producción.  resultan más productivas cuando se utilizan medios definidos.
  • 36. Ejemplo de medios definidos
  • 37. Ejercicios resueltos de Balance de Materia Problema 1 Continua…….
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